Aunque existe un método mecánico
para aislar protoplastos, el método enzimático es la forma más importante y
efectiva para ese propósito.
El método mecánico tiene, ante
todo, un interés histórico, ya que su rendimiento es bajo, su procedimiento
tedioso y su aplicabilidad limitada. Dicho método consiste en provocar un
choque osmótico para producir plasmólisis en las células, las cuales se rompen
luego mediante un corte; luego se pueden liberar los protoplastos de las células
rotas mediante el establecimiento de su nivel osmótico.
El método enzimático para el
aislamiento de los protoplastos consiste en incubar las células en una mezcla
de enzimas que regalan la pared celular. Los principales factores que se deben
considerar para el éxito son:
1) El
tipo de enzimas que se usaran
2) La
composición del medio en que ellas actuaran
3)El
material de origen de los protoplastos
Para el aislamiento de
protoplastos para el método enzimático en necesario usar mezclas de enzimas, en
lugar de usarlas individualmente. Se utilizan enzimas de las siguientes clases
generales: celulosas, hemicelulosas y pectinasas las cuales se obtienen
generalmente de preparaciones comerciales.
FUENTE:
Resumen del libro de cultivos de tejidos capitulo 10
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