3.2.2 Tejidos Empleados

1. Toma un ápice meristemático (0,2-1 mm).

2. Siembra en el medio del tubo.

3. Fase de proliferación: crecimiento de brotes. Subcultivos.

4. Fase de enraizamiento (cambiar el medio).

5. Primera fase de aclimatación. Es muy importante el que la planta pueda llegar o no al campo. Invernaderos, bolsas de plástico, bandejas de vidrio, etc..

6. Segunda fase de aclimatación. Siempre en invernadero.

7. Plantación en el campo.
Fases del cultivo de embriones
Se utiliza mucho en manzano.
1. Se desinfecta el fruto en alcohol. Se flamea.

2. Se coge el embrión de la semilla.

3. Se inocula en el tubo.

4. A las 1-2 semanas, la planta está más o menos reconocible.

5. Se deja crecer y se pasa por las fases de aclimatación.
Micropropagación

Se parte de una yema, de bráctea o axilar.
Se empieza a desarrollar en el medio de cultivo.
Entre la fase de proliferación y de enraizamiento hay muchos subcultivos (para obtener más plantas).
El número de subcultivos depende del material vegetal.
Ejemplo de micropropagación de Kiwi:
- Se parte de un trozo de tallo.

- Al cabo de 4 semanas se obtiene una yema y crece un brote.

- En la fase de proliferación intentamos obtener gran cantidad de brotes.

- Sacamos microestaquillas del primer brote, haciendo subcultivos cada 6-8 semanas hasta llenar el vidrio.

- Al aumentar la concentración de auxinas se obtienen plantas enraizadas.

- Puede hacerse de forma industrial y la fase de enraizamiento se hace en vivo.
Cultivo de callo in vitro
Se parte de un trozo de hoja o de tallo; bien de una planta madre de maceta o de una planta que viene de cultivo in vitro.
El medio puede ser sólido o líquido.
Se forma entonces una estructura de callo, de la que parten brotes, o también proembriones, que al unirse forman una estructura similar al embrión.
A partir de entonces se desarrolla normalmente.
Obtención de plantas haploides
Normalmente se trabaja con la antera en su totalidad, no con granos de polen en particular.
De una yema de flor se coge una antera antes de que se abra y se hace un cultivo; bien por embriogénesis u organogénesis.

• Embriogénesis: se forman células (poliembriones).
  
• Organogénesis: se forma una estructura de callo que puede venir o bien de tejidos de la antera (diploide), o bien del grano de polen (haploide).

No se riega nunca por aspersión (riesgo de patógenos), siempre con regadera.
Problemas en el cultivo in vitro

* Contaminación: es grave.

* Vitrificación: es una reacción de las plantas que las hace adquirir apariencia de vidrio. La única solución es hacer un subcultivo de material sano, es decir, se saca y se cortan los trocitos que estén bien.

FUENTE: 

http://www.ecured.cu/index.php/Microinjerto_de_%C3%A1pices_caulinares_in_vitro