3.1 Generalidades

• En la cámara de flujo laminar no puede entrar material contaminado. 
• El problema más importante en todo el proceso del cultivo in vitro son las contaminaciones. 
• En el autoclave no se pueden meter determinadas sustancias, como vitaminas, antibióticos, ácido giberélico, sacarosa, encimas, extractos vegetales, etc., ni tampoco recipientes que no soporten altas temperaturas. 
• El vidrio ha de ser de muy buena calidad para que no suministre a las medias sustancias contaminantes para la planta. Normalmente se prepara el medio y se filtra directamente. El problema es que se absorben en el filtro determinadas sustancias. 
• Los reguladores de crecimiento (hormonas) son imprescindibles, ya que sin ellos no se puede hacer el medio de cultivo. 
• El pH ideal es 6, pero puede oscilar entre 5,5 y 6,5.
• Se necesita agar y medio sólido 0,6-0,9%.
• El medio de cultivo realmente sólo tiene que llevar agua, fuente de energía (azúcares) y reguladores de crecimiento. 
• El medio de cultivo es secreto, y se pueden tardar dos años en prepararlo.
• En la cámara de cultivo se aplican cantidades variables de luz (16-20 horas). También existen plantas que se desarrollan en la oscuridad. Las temperaturas también varían. Lo normal son 22-26ºC, aunque en ocasiones se exigen fríos de 4ºC y también 28-30ºC para plantas tropicales. 
• Igualmente, en el éxito de esta técnica de propagación también influyen determinadas características de la planta, como el tipo, genética e incluso el tipo de implante, parte más juvenil o más adulta. 
• En cuanto a los recipientes, deben permitir el intercambio de gases, pero evitar la pérdida de agua, lo que provocaría un aumento de la concentración de sales, y por tanto la muerte de la planta. De ahí la importancia del cierre.

·         Subcultivos o replicado

·         Cuando sembramos micro estaquillas en cultivo in vitro, no nos interesa que se emitan raíces ni hojas, sino que se produzca una proliferación (crecimiento) para obtener nuevas micro estaquillas. Son lo que se denominan subcultivos.

·         No se pueden hacer infinitamente ya que se agota el material vegetal; tan sólo se hace 8-10 veces.

·         Ocurre entonces lo siguiente:

·         - El medio nutritivo se agota y se seca.
- El material vegetal ocupa todo el tubo.
- Se produce un cambio de olor en el medio (sustancias tóxicas).
- El medio se hace líquido.

 FUENTE:

http://articulos.infojardin.com/Frutales/cultivo-in-vitro-reproduccion.htm