Los vectores de clonación son moléculas transportadoras
que transfieren y replican fragmentos de ADN que
llevan insertados mediante técnicas de ADN recombinante. Para que
sirva de vector, una molécula debe ser capaz de replicarse junto con el
fragmento de ADN que transporta. También tiene que tener secuencias de
reconocimiento que permitan la inserción del fragmento de ADN a clonar.
Para insertar un fragmento de
ADN al vector, se utiliza una enzima de restricción, y se mezcla
con fragmentos de ADN producidos con la misma enzima.
Los vectores que transportan
un fragmento insertado se denominan vectores recombinantes.
Tipos de vectores
Hay muchos vectores de
clonación, que difieren en la especificidad de la célula huésped, el
tamaño de los insertos que pueden transportar y en características como el
número de copias que producen y el número y tipo de genes marcadores que contienen, entre
otras
Plásmidos
Los plásmidos fueron los
primeros vectores que se desarrollaron, y aún son ampliamente usados. Estos
vectores proceden de moléculas de ADN de doble cadena extracromosómicas que se encuentran de manera natural y
que se replican autónomamente dentro de las células bacterianas.
pUC18
Es un Plásmido muy utilizado,
ya que presenta unas características que son muy beneficiosas:
- Es pequeño, de modo que
puede transportar fragmentos de ADN relativamente grandes (de unos 10.000 pares de bases).
- Tiene un origen de
replicación y puede producir hasta 500 copias de los fragmentos de ADN
insertado por célula.
- Se ha modificado para que
presente muchas secuencias de reconocimiento para enzimas de restricción que se
han agrupado en una región denominada polylinker o múltiple cloning site.
- Permite la identificación
sencilla de los plásmidos recombinantes, ya que contiene un fragmento del gen
bacteriano lacZ que produce colonias de color azul. Si se
inserta un fragmento de ADN en el polylinker, se inactiva este gen,
y da lugar a colonias de color blanco.
Bacteriófago
lambda
Artículo
principal: Fago λ.
El genoma del fago lambda se ha cartografiado y secuenciado
completamente. Para ser utilizado de vector, el tercio central de su cromosoma
puede ser reemplazado por ADN foráneo, sin que ello afecte a la capacidad del
fago de infectar células y formar cápsides.
Para clonar ADN utilizando
este vector, se purifica el ADN del fago y se corta con una enzima de
restricción, con la misma enzima de restricción cortamos el fragmento de ADN de
interés y los unimos con una ADN ligada Los vectores lambda recombinantes se
empaquetan in vitro en las cápsides proteicas del fago, y se introducen en
células huésped bacterianas. Dentro de las bacterias, los vectores se replican
y forman muchas copias del fago infectivo, llevando todas ellas el fragmento de
ADN de interés en la clonación. Los vectores fágicos pueden transportar
fragmentos de hasta 20 kb ( kilobases).
Cósmidos
Artículo
principal: Cósmico.
Los cósmidos son vectores híbridos utilizando partes del cromosoma de lambda y de plásmidos. Tienen la secuencia cos del fago
lambda, necesaria para el empaquetamiento del ADN del fago dentro de su
cubierta proteica, además contienen secuencias plasmídicas necesarias para la
replicación y genes de resistencia a antibióticos. Los cósmidos pueden transportar
casi 50 kb de ADN insertado.
YAC
Artículo
principal: Cromosoma artificial de
levadura.
Los YAC son cromosomas
artificiales de levadura. Un YAC tiene telómeros en sus extremos, un origen de
replicación y un centrómero. Estos componentes están unidos a genes marcadores
de selección y a un grupo de enzimas de restricción para insertar ADN exógeno.
Estos cromosomas artificiales
de levadura permiten clonar grandes trozos de ADN, de 100 a 1000 kb.
BAC
Artículo
principal: Cromosoma artificial bacteriano.
Un BAC es un cromosoma
artificial bacteriano, basado en el Plásmido de fertilidad ( factor F ) de
bacterias.
El factor F es un Plásmido que
se replica independientemente y que transfiere información genética durante la
conjugación bacteriana.
Los BAC pueden transportar
insertos de hasta 300 kb.
FUENTE:
http://es.wikipedia.org/wiki/Vector_de_clonaci%C3%B3n
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