- CORTE: Las moléculas de DNA se pueden cortar en
sitios específicos con endonucleasas de restricción del tipo II. Las
endonucleasas de restricción del tipo II reconocen en el DNA de dos bandas
secuencias cortas, cortan las dos bandas de la molécula y la mayor parte
produce fragmentos de DNA con extremos complementarios de una banda,
llamados extremos pegajosos.
La utilidad de las enzimas tipo II para los análisis de DNA se deriva de las siguientes cuatro propiedades importantes: - Reconocen secuencias cortas
(de 4 a 7 pares bases), de tal manera que la probabilidad de tener una
molécula de DNA por lo menos con un sitio de reconocimiento para
cualquier enzima es muy grande.
- Cortan siempre los mismos
sitios, lo cual hace que las observaciones sean reproducibles y reales.
- Cortan virtualmente todos
los sitios disponibles en el DNA aunque cortan unos sitios más
rápidamente que otros.
- La mayoría de las enzimas
producen DNA de dos bandas con extremos pegajosos, que son las moléculas
más fáciles de ligar In Vitro.
- UNIÓN: Dos o más fragmentos unidos pro enzimas
forman moléculas recombinantes. Los fragmentos de DNA pueden ser de
cualquiera de las siguientes fuentes:
o
DNA naturales de
diversos organismos, generados por cualquier sistema de corte.
o
Moléculas de DNA
sintetizadas enzimáticamente, usando RNA como molde para la transcriptasa
inversa.
o
DNA artificiales
producidos por síntesis química y/o enzimática.
- CLONACION: Para que la unión de dos moléculas de
DNA sea de utilidad práctica, una de las dos debe ser autorreplicante, es
decir, debe tener suficiente información para replicarse en alguna célula
viva disponible. Plásmidos y Virus llenan esta condición pues pueden ser
introducidos a células apropiadas donde se replican normalmente, junto con
el DNA inserto. Se debe definir ahora algunos términos útiles:
Vector o Vehículo: Es la molécula autorreplicante.
Inserto: Es el fragemento de DNA "exógeno" que se liga al vector.
Anfitrión: Es la célula empleada en la propagación del vector con su inserto, es decir, el DNA recombinante.
Clonación molecular: Es la propagación en la célula anfitriona de las secuencias de DNA inserto. Las células con un DNA recombinante se pueden clonar.
No hay comentarios:
Publicar un comentario